超分辨率显微镜

活细胞成像

粒子跟踪结合细胞成像

使用Vutara的活细胞单分子定位显微镜

生物成像需要观察细胞内的动态结构;无论是可视化的单个生物分子在细胞(粒子跟踪)或观察生物过程,如膜,细胞器或细胞骨架运动。

Vutara VXL显微镜的功能是理想的活细胞单分子定位显微镜:

  • 3D定位使用专利双翼技术-每幅图像有1µm的3D数据-不采取Z系列
  • Z系列可扩展轴向范围
  • 快速捕获-高达800fps全帧,高达3000fps与较小的ROI
  • 灵敏的探测器冷却的科学CMOS相机
量子点标记表皮生长因子受体的单粒子流线。
Alexa Fluor 647®标记转移的实时成像。上,转铁蛋白团沿着细胞膜移动。下面,用时间把图像加色。

粒子跟踪

Vutara VXL显微镜是专为单分子定位显微镜设计的,因此是理想的设计用于粒子跟踪实验。Vutara固有的在高速和三维成像单个荧光团的能力使其成为粒子跟踪的理想设备。样品可以用有机染料、蛋白质或量子点标记,并使用Vutara VXL的高速和灵敏的相机成像。Vutara的SRX软件具有内置的粒子跟踪算法,用于跟踪多帧荧光体。这是单分子定位显微镜的一个强大和独特的特点,而不是基于图像的超分辨率显微镜,如STED或SIM。SRX软件还包括一个全面的粒子跟踪统计包,用于分析您的数据。

在左边我们可以看到单个EGF受体的扩散用量子点标记。

细胞成像

Vutara VXL显微镜是专为单分子定位显微镜设计的,能够在有意义的时间尺度上捕捉生物运动。这种独特的成像方式允许用户收集感兴趣的结构的动态超分辨率图像,同时也为用户提供每个分子随时间变化的精确3D位置。这突出了单分子定位显微镜的独特成像方式,并将其与基于超分辨率的成像技术区分开来。

在右边我们看到两个监测活细胞线粒体动态的实验。其中一张用橙色的HaloTag®染料(549)拍摄,另一张用可光激活的远红外染料(PA-JF-646®)标记。

结合粒子跟踪和细胞成像

Vutara VXL显微镜的能力,执行多色单分子成像允许一些独特的实验设计。左图为表达tomm-20::HaloTag®的细胞的两色实验。在这个实验中,tomm20::HaloTag®被标记为密集浓度的JF549®和非常稀疏浓度的PA-JF646®。这使得高密度染料可以作为上下文标记,允许随着时间的推移,线粒体的重建和定位。而第二种染料可以跟踪线粒体中单个分子的扩散。利用这项技术,我们可以监测膜内蛋白质扩散如何随着线粒体运输和融合或裂变而变化。

线粒体活体成像的叠加和单个tomm20蛋白在线粒体中扩散的单个粒子跟踪的流线。
三个单个tomm20蛋白的粒子轨迹。
tomm20扩散流线叠加,线粒体结构图像。