结合Bruker的软件控制、自动化、完全集成微流体装置这个Vutara VXL超分辨显微镜唯一的商业系统这提供了开箱即用的多路DNA-PAINT功能。在这些工具上进行DNA-PAINT成像可以在单分子定位显微镜中实现低于10 nm的定位精度具有无限的复用潜力.
此外,带有微流体系统的Vutara显微镜还具有以下优点:
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DNA-PAINT是一种通过将荧光团标记的短(<10个核苷酸)寡核苷酸与结合到靶分子(通常为抗体)的互补寡核苷酸结合来实现单分子定位的技术。它允许广泛的成像模式,从全细胞广泛的Z-堆栈到高分辨率多目标图像。
DNA-PAINT的工作原理是将含有荧光团的短“成像寡核苷酸”瞬时结合到目标上的互补寡核苷酸(称为“对接链”),如抗体、纳米体、适配子或自杀酶配体。
DNA-PAINT的超分辨率成像包括几个步骤,包括:
由于样品浸泡在大量过量的不断交换的成像链中,因此目标基本上是不可漂白的,这使得批量处理大量帧和扩展的Z堆栈成为可能。
DNA-PAINT允许低于10纳米的定位精度,使其成为最精确的显微镜技术之一。
在这里,使用了一个水浸1.2 NA物镜的Vutara显微镜进行DNA-PAINT实验。这张图片显示了一个完整的BS-C-1细胞的微管蛋白网络,该网络用微管蛋白抗体标记,该抗体与DNA-PAINT二级抗体结合。插图显示微管蛋白网络的放大部分。微管管腔清晰可见。
使用DNA-PAINT可以实现多路多色超分辨率成像。
DNA-PAINT具有大规模多色Z-堆叠的潜力,这是因为样品浸泡在几乎无限量的荧光团中。这使得由数百万次定位组成的大规模z叠成像成为可能。
在这里,在Vutara单分子定位显微镜上进行了双色DNA-PAINT实验。微管蛋白用青色标记,网格蛋白用品红标记。此外,由于DNA-PAINT的不可漂白性质,大Z-堆叠是可能的。
DNA-PAINT在多路成像方面具有巨大的潜力。
在这里,使用Vutara VXL和集成射流装置进行了多靶DNA-PAINT实验。在不同的探针上使用正交的对接链,可能有无限数量的目标。
图中还显示了在Vutara单分子定位显微镜和集成射流装置上进行的四靶DNA-PAINT实验。肌动蛋白洋红、tom20青色、微管蛋白黄和网格蛋白绿。